胎盤抑製mTOR信號提供了一個胎盤瘧疾和減少出生體重之間的聯係

背景

胎盤惡性瘧原蟲瘧疾可以觸發intervillositis局部炎症反應與低出生體重超過胎盤瘧疾感染。胎兒生長(因此出生體重)依賴於胎盤氨基酸運輸,在胎盤受損特征intervillositis。這裏,我們測試的假設機械的目標雷帕黴素(mTOR)信號途徑調節氨基酸運輸,在胎盤抑製特征intervillositis,導致低出生體重。

方法

我們確定intervillositis之間的聯係,mTOR信號活動,在組織切片和氨基酸吸收未感染的胎盤和感染瘧疾的胎盤沒有intervillositis,使用主要在體外模型人滋養層細胞(PHT)。

結果

我們證明了(1)胎盤mTOR活動較低與intervillositis胎盤瘧疾病例,(2)胎盤mTOR活動與炎症的程度負相關,和(3)胎盤抑製mTOR活動與減少胎盤吸收氨基酸和低出生體重。PHT細胞中,我們表明,(1)抑製mTOR胎盤特征信號是一種機械的聯係intervillositis和氨基酸的吸收減少,(2)本構mTOR激活部分恢複氨基酸吸收。

結論

我們的數據支持這一概念,胎盤抑製mTOR信號構成機械胎盤特征之間的聯係intervillositis和氨基酸的吸收減少,這可能導致低出生體重。恢複胎盤mTOR信號在胎盤瘧疾可能會增加出生體重和提高新生兒存活率,代表一個新的潛在的治療方法。

全球六分之一的嬰兒出生低出生體重(< 2500 g),底層80%的新生兒死亡的主要危險因素(1]。世界衛生組織重申2025年降低低出生體重發生率的30%作為全球健康優先。瘧疾在懷孕的主要原因是低出生體重和負責~ 900000低出生體重分娩和每年~ 200000嬰兒死亡2]。盡管控製措施,惡性瘧原蟲瘧疾仍然影響每年大約有8500萬孕婦(3]。對瘧疾在懷孕和低出生體重之間的關連。

瘧疾在懷孕會導致胎盤瘧疾的封存的特征惡性瘧原蟲來華的紅細胞在胎盤的血液孕產婦intervillous空間。這可能引發母性的招聘和激活免疫細胞,導致局部炎症反應稱為intervillositis。胎盤特征intervillositis比胎盤瘧疾與低出生體重沒有intervillositis [4]。底層機製連接胎盤特征intervillositis和出生體重下降是未知的,阻礙了發展的幹預策略,旨在提高嬰兒的出生體重瘧疾感染的女性。當前瘧疾控製策略如蚊帳,間歇性預防瘧疾治療的孕婦,和他們的飲食補充有限的功效提高出生體重(5,6]。有一個重要而緊迫的需要額外的直接幹預提高出生體重,可以補充現有的瘧疾控製策略。

胎盤營養轉移控製胎兒營養的可用性,這是胎兒生長的一個關鍵決定因素(因此出生體重)。胎盤轉移能力的營養是高度依賴於營養轉運蛋白的表達和功能的合胞體滋養層(人類胎盤的營養運輸上皮)(7]。係統是一組氨基酸轉運蛋白調節非中性氨基酸的吸收。減少胎盤與出生體重下降有關係統活動在人類[8,9和在動物模型10,11]。重要的是,減少胎盤係統活動的大小與女性胎兒生長受限的嚴重程度(8)和胎盤係統活動減少胎兒生長受限之前觀察到動物模型(10,11]。胎盤係統的差別這表明對這些活動直接導致出生體重減少。我們先前表明,胎盤特征intervillositis減少係統轉運蛋白的表達和活性,這係統活動和出生體重在胎盤瘧疾呈正相關(12]。然而,胎盤的機製(s)特征intervillositis影響胎盤是未知的係統活動。

雷帕黴素(mTOR)信號通路的機械的目標是一個nutrient-sensing通路調節細胞生長,增殖,和代謝激素,生長因子,和養分有效性(附加文件1:表S1)。它存在兩個蛋白質複合物:mTOR複雜1 (mTORC1),主調節器的蛋白質翻譯和細胞生長和增殖;和mTOR複雜2 (mTORC2),調節細胞骨架組織和細胞的新陳代謝。mTOR表達在胎盤合胞體滋養層,它調節氨基酸吸收通過影響販賣的質膜轉運蛋白(13]。上遊信號如氨基酸、生長因子、遊離脂肪酸、氧氣,細胞因子已被證明影響胎盤mTOR信號活動(14,15]。在動物模型中,胎盤mTOR抑製與減少胎盤氨基酸運輸(11]。類似的研究結果中觀察到人類胎兒生長受限的原因與胎盤瘧疾(16]。這些數據表明,胎盤mTOR信號影響胎兒生長和出生體重通過調節經胎盤的營養物質運輸與母性的信號。

這裏,我們首次提供證據表明,抑製mTOR胎盤特征信號是一種機械的聯係intervillositis和減少氨基酸運輸,導致低出生體重。我們的發現開放的新途徑的研究開發針對胎盤mTOR的幹預信號在瘧疾流行人群改善出生體重和新生兒健康。

詳細的材料和方法可以在附加的文件1。

收集胎盤樣品

大學醫學院的研究倫理委員會,馬拉維,批準了這項研究。書麵知情同意得到初產的馬拉維婦女。胎盤絨毛組織切片收集交付後分組根據組織學如前所述[4:未感染的(沒有瘧疾,沒有intervillositis),胎盤瘧疾沒有intervillositis,並與intervillositis胎盤瘧疾。表1總結了研究對象的臨床特點。

主要的滋養層細胞培養

胎盤絨毛組織樣本收集與正常健康女性詞懷孕後批準的書麵知情同意科羅拉多多個機構審查委員會(comirb - 14 - 1073)。主要人類滋養層(PHT)細胞分離胰蛋白酶消化和Percoll離心最初描述(17與修改()18]。人體絨毛膜促性腺激素分泌Syncytialization評估。細胞生存能力評估是由乳酸脫氫酶釋放。

Monocyte-conditioned媒體

的媒體準備如前所述[12與修改)。CD14⁺細胞培養在1:1的混合物杜爾貝科修改鷹的介質(DMEM Sigma-Aldrich)和火腿的F-12營養混合物(表達載體)補充10%胎牛血清和青黴素和鏈黴素。

小幹擾RNA轉染

PHT細胞轉染10 nM DEPTOR小幹擾RNA(核;SASI_Hs01_00204344 Sigma-Aldrich)或與爭奪siRNA控製使用Lipofectamine RNAiMax轉染試劑(熱科學)根據製造商的協議。

氨基酸的吸收

通過測量Na係統活動進行評估⁺端依賴的¹⁴C-methyl-aminoisobutyric酸(MeAIB)如前所述13]。

免疫印跡

胎盤勻漿和PHT細胞溶解產物加載和蛋白質分離在4 - 12% Bis-Tris Mini-Protean蛋白質凝膠凝膠(英傑公司)或12% (Bio-Rad)和轉移到0.20 -μm硝化纖維素膜(通用電氣醫療集團)或聚偏二氟乙烯膜(Bio-Rad)。膜是孵化主要抗體:兔子anti-4EBP-1, anti-phospho-4EBP-1(刺^37/46),anti-ribosomal蛋白質S6, S6 (Ser anti-phospho-ribosomal蛋白質^235/236)、anti-Akt anti-phospho-Akt (Ser^473年),和鼠標anti-β-actin (Sigma-Aldrich)。辣根peroxidase-conjugated二級anti-rabbit和anti-mouse抗體(細胞信號)被用作二次抗體。蛋白質是可視化使用化學發光檢測。微用NIH的ImageJ執行軟件。

細胞因子分析

細胞因子在monocyte-conditioned媒體分析多路複用bead-based免疫測定使用一組人類炎性細胞因子抗體(BD生物科學)根據製造商的指示。

數據顯示和統計分析

數據作為中位數和散點圖或中位數和內部四分位範圍。數據分析和圖表設計使用棱鏡5軟件(圖墊)。兩群比較了使用Mann-Whitney測試並使用克魯斯卡爾-沃利斯檢驗三組比較。斯皮爾曼相關測試是用來評估相關性的95%置信區間。

胎盤是胎盤抑製mTOR信號特征intervillositis

我們的目的是評估的影響惡性瘧原蟲人類胎盤感染和intervillositis mTOR信號使用的mTOR功能讀數作為額外的文件進行了總結1S1:表。胎盤mTOR信號活動被量化測量的比率phosphorylated-to-total蛋白表達水平的下遊mTORC1 (rpS6的目標^Ser235/236和4 e - bp1^Thr37/46)和mTORC2(一種蛋白激酶^Ser473)(圖。1)。的活動mTORC1和mTORC2(無花果。1 b)在婦女胎盤低特征intervillositis相比胎盤無毒性(rpS6:P= 0.01;4 ebp-1:P= 0.03;一種蛋白激酶:P= 0.0006)和感染胎盤沒有intervillositis Akt信號(一種蛋白激酶:P= 0.02)。這些結果與胎盤之間的因果關係是一致的特征intervillositis和抑製mTOR信號。這是進一步支持mTOR信號之間的負相關活動和intervillositis測量的嚴重性的單核細胞的百分比intervillous(表空間2和額外的文件2:圖S1)。

胎盤抑製mTOR信號與受損的氨基酸運輸和出生體重減少

抑製mTOR信號可能導致出生體重減少了影響氨基酸運輸。我們確定胎盤mTOR信號活動之間的關係,氨基酸運輸和出生體重。mTOR信號顯示正相關與我們先前microvillous質膜氨基酸吸收數據(12(表)測量係統活動2和額外的文件2:圖S1)。這是我們先前的報道證明符合mTOR信號是一個胎盤的主要調節器係統活動(19,20.),胎兒生長的一個重要因素。重要的是,我們發現mTOR信號之間的正相關活動和出生體重(表2和額外的文件2:圖S1)。出生體重也略微intervillositis程度呈正相關(n= 38;r =−0.27;P= 0.093)。總的來說,這些數據與模型一致,胎盤特征intervillositis減少胎盤mTOR信號,從而降低氨基酸吸收和出生體重。

Intervillositis抑製mTOR信號和係統氨基酸運輸活動培養主要人滋養層細胞

抑製mTOR信號之間建立因果關係,減少係統活動胎盤特征intervillositis,我們改編出版協議的研究胎盤對胎盤的反應特征intervillositis BeWo細胞用於PHT細胞(12]。胎盤特征intervillositis是使用從單核細胞條件培養液/建模惡性瘧原蟲來華的紅細胞培養(這裏“感染條件培養基”)。這個條件培養液IL-1β等顯示高水平的炎性細胞因子,il - 6,引發,TNF和il - 10(附加文件3:圖S2)。從單核細胞條件培養液/未感染的紅細胞培養(這裏“未受感染的條件培養基”)和培養基(這裏“控製”)被用作控製。

mTORC1和mTORC2信號活動顯著降低在PHT細胞暴露於感染條件培養基相比PHT細胞暴露於感染條件培養液(4 ebp-1:P= 0.04;一種蛋白激酶:P= 0.09)或控製介質(rps6:P= 0.01;4 ebp-1:P= 0.008;一種蛋白激酶:P= 0.002)(圖2)。這種抑製mTOR信號活動不是減少係統活動PHT細胞暴露於感染條件培養基相比PHT細胞暴露於未受感染的條件培養基(P= 0.04)或控製介質(P= 0.03)(圖2攝氏度)。PHT細胞的生存能力是影響接觸受感染的媒體(附加文件4:圖S3)。總的來說,這些數據是在協議與我們的觀察胎盤瘧疾的女性(無花果。1),支持假說胎盤特征intervillositis抑製mTOR信號,從而降低係統的活動。

激活mTOR信號響應胎盤部分恢複係統活動特征intervillositis

堅定地建立胎盤mTOR信號抑製胎盤作為機械的聯係特征intervillositis和減少係統活動,我們確定的影響本構mTOR信號激活係統活動PHT細胞暴露於感染的條件培養基。持續激活mTOR信號,我們沉默DEPTOR mTOR的內源性抑製劑(21),使用核。DEPTOR沉默DEPTOR蛋白表達減少了約40% (P= 0.004)(圖3)而不影響細胞分化和生存能力(附加文件4:圖S3)。正如所料,DEPTOR沉默顯著增加mTORC1信號活動(rps6: + 44%,P= 0.008;4 e - bp1: + 60%,P= 0.004;無花果3 b, c)和調節係統的活動(+ 66%,P= 0.009;無花果。3 d)[13]。這與先前的報道是一致的,沉默的DEPTOR激活mTORC1 [21]。

我們量化引起的係統活動的減少受感染的條件培養基與小幹擾rna與PHT DEPTOR PHT細胞轉染細胞轉染核與爭奪。與核,細胞轉染係統活動減少了72%,以應對感染DEPTOR-silenced細胞條件培養基而係統活動(圖隻下降了50%。3 e)。這表明mTOR信號激活DEPTOR消聲減毒的抑製係統活動,以應對由大約30%被感染的條件培養基(P= 0.004)。這表明胎盤mTOR激活可以部分恢複對胎盤的胎盤氨基酸吸收特征intervillositis。

降低低出生體重發生率的仍然是一個全球衛生優先減少新生兒發病率和死亡率,嬰兒成長和認知發育障礙、慢性疾病在以後的生活中(22]。理解減少出生體重在胎盤瘧疾的發病機理提供了基礎小說發展的幹預措施,補充現有的瘧疾控製方法直接改善胎兒生長和防止貧困新生兒和妊娠結局。在這項研究中,我們提供了第一個證據作用的胎盤mTOR信號在胎盤氨基酸吸收和低出生體重降低胎盤特征intervillositis。具體來說,我們證明在胎盤抑製mTOR信號特征intervillositis和培養媒體PHT細胞暴露於感染瘧疾的條件。此外,我們提供的證據表明,信號抑製mTOR的機械化intervillositis氨基酸減少交通工具的鏈接。

mTOR信號途徑提出了發揮核心作用在胎盤營養傳感23]。該模型認為,胎盤調節其營養物質運輸功能匹配孕產婦胎兒供應和需求響應上遊孕產婦信號和調製胎盤功能,包括經胎盤的氨基酸運輸(23,24]。在胎盤特征intervillositis、孕產婦單核細胞激活感染紅細胞在intervillous空間釋放炎症介質創建一個獨特的環境特點是高水平的細胞因子和趨化因子,如IFN-γTNF、il - 10, MCP-1, MIP-1α,引發,CCL2, CCL3 [25- - - - - -27]。這些循環炎症介質可能是負責我們觀察到的胎盤抑製mTOR信號與intervillositis婦女的胎盤,胎盤瘧疾。intervillositis的關鍵作用導致胎盤抑製mTOR信號支持在當前強烈的負麵mTOR信號之間的相關性的研究活動和intervillositis的程度。

我們的體外研究結果和在我們之前出版12)表明,胎盤特征intervillositis專門與受損的係統活動,胎盤瘧疾本身(即。沒有intervillositis)與受損係統無關的活動。同時,我們在以前的出版物(顯示12)感染的紅細胞,完整的或細胞溶解,不影響係統的活動。這些集體觀測主張有限的角色(如果有的話)胎盤瘧疾本身受損的係統活動。因此,我們選不包括parasite-conditioned媒介控製。我們試圖模型intervillous空間的獨特的環境與胎盤的女性特征intervillositis從單核細胞共培養和使用條件培養基惡性瘧原蟲來華的紅細胞。這個條件培養液顯示高水平的IL-1β,il - 6,引發,TNF和il - 10。細胞因子如IL-1β已被證明抑製mTOR活動(28)和類似的細胞因子資料已報告在瘧疾感染的孕婦(26,29日]。我們的體外模型的相關性進一步強化了使用PHT細胞,進行細胞的分化,形成多核合胞體島嶼文化。我們重現了發現胎盤瘧疾的女性在這個細胞培養模型,提供支持的概念,從力學上看胎盤抑製mTOR信號鏈接胎盤特征intervillositis與降低氨基酸吸收。

mTORC1是主調節器的轉化通過磷酸化的下遊目標包括機械和激活蛋白質合成4 ebp-1(額外的文件1:表S1)。在胎盤組織獲得女性的胎盤瘧疾和在培養的PHT細胞中,我們觀察到胎盤特征intervillositis持續抑製磷酸化4 ebp-1但不是核糖體蛋白S6 (rps6),間接mTORC1的目標。這可能是因為4 ebp-1直接下遊mTORC1的謊言,不像rps6。減少4 ebp-1磷酸化阻止蛋白翻譯起始,減少蛋白質合成(30.]。與我們的研究結果相似,人類胎兒生長受限,由於胎盤機能不全與胎盤瘧疾與顯著抑製4 ebp-1磷酸化(16),這可能會降低蛋白質合成。我們推測,胎盤抑製蛋白質合成的抑製mTOR信號進一步有助於限製胎兒胎盤增長特征intervillositis。

我們還觀察到胎盤特征intervillositis減少一種蛋白激酶的磷酸化,mTORC2目標,在更大程度上比mTORC1目標。內質網(ER)壓力抑製一種蛋白激酶磷酸化(31日,32),據報道non-malaria例胎盤的胎兒生長受限(16]。在胎盤特征intervillositis,炎症介質在intervillous空間可能誘發合胞體滋養層ER應激(33),這可能導致胎盤mTORC2信號抑製(31日]除了mTOR-dependent機製。鑒於mTORC2活動和係統之間的強有力的協會活動體外(表2額外的文件2:圖S1)和體外甲狀旁腺素細胞(20.),這個大mTORC2信號抑製可以解釋係統抑製的程度在胎盤特征intervillositis [12]。

我們建立mTOR信號作為機械的胎盤特征之間的聯係intervillositis和減少氨基酸吸收使用RNAi-mediated DEPTOR沉默,內生mTOR抑製劑(21]。擊倒mTOR DEPTOR導致本構激活的信號(34]。在最近的研究中,DEPTOR沉默PHT細胞導致mTORC1但不是mTORC2信號活動增加。這是在協議與彼得森和同事建立DEPTOR足以擊倒的激活mTORC1但不是mTORC2 [21),導致不對稱影響mTOR信號(35]。然而,我們以前觀察到DEPTOR沉默PHT細胞激活mTORC1和mTORC2 [13]。蛋白序列的差異DEPTOR siRNA用於這些研究可能構成不同的結果。鑒於胎盤特征intervillositis婦女的胎盤,胎盤瘧疾和文化PHT細胞似乎抑製mTORC2比mTORC1更強烈,可能大部分的係統活動的減少針對胎盤特征intervillositis由mTORC2介導。缺乏顯著影響mTORC2 DEPTOR沉默的信號可以解釋為什麼DEPTOR沉默隻能部分恢複係統活動的減少,以應對感染條件媒體。另外,部分恢複也可能是由於DEPTOR DEPTOR siRNA轉染後的不完整的沉默。無論如何,這一發現表明,增加胎盤mTOR信號可以上調氨基酸的吸收,從而提高出生體重。

我們的研究結果提供的證據之間的因果聯係胎盤特征intervillositis, mTOR信號抑製,和氨基酸的吸收減少,胎兒氨基酸可用性的一個重要因素,胎兒生長。mTOR信號之間的正相關和出生體重進一步支持了假設胎盤mTOR信號影響胎兒生長。我們選擇了把重點放在係統因為這個氨基酸轉運蛋白是由mTOR的胎盤轉運係統最與胎兒生長密切相關8]。進一步的工作應該調查是否其他胎盤氨基酸轉運蛋白在胎盤抑製特征intervillositis。此外,炎症介質的詳細剖析intervillous血液與條件媒體將有助於確定抑製胎盤mTOR信號的因素。

我們的研究結果發現胎盤mTOR作為幹預的潛在有價值的目標旨在改善出生體重在孕期瘧疾。有強烈的興趣目標治療mTOR活動發展和各種mTOR信號監管機構最近進行的臨床試驗(其他條件36]。一些已經應用於臨床37,38]。此外,最近的研究提供了證據,活化劑mTOR信號可以用來防止或逆轉胎兒生長受限的原因除了胎盤瘧疾(39- - - - - -49]。例如,妊娠後期精氨酸治療不明原因的女性胎兒生長受限的出生體重增加(177 - 328克;~正常出生體重的10%)和胎兒生長受限的發病率下降40 - 50% (41,43]。重要的是,這些幹預措施進行診斷後,胎兒生長受限,這表明精氨酸可以搶救胎兒生長。亮氨酸治療(結合其他支鏈氨基酸)也被反複證明改善胎兒生長在不同的物種和胎兒生長受限的模型(47- - - - - -49]。例如,亮氨酸是必不可少的衰減胎兒生長受限限製蛋白質引起的大鼠(47)和恢複胎兒體重在老鼠模型中腫瘤導致胎兒生長受限(49]。值得注意的是,這些研究證實亮氨酸補充胎盤mTOR信號也會被激活。我們建議恢複胎盤mTOR信號在胎盤瘧疾將增強胎盤氨基酸吸收和提高胎兒生長和妊娠結局,應進一步調查。這可能是第一次使用我們的體外模型通過測試mTOR活化劑的能力恢複氨基酸吸收PHT細胞暴露於感染的媒體。積極打擊可以進一步研究在動物模型的瘧疾在懷孕50]。

各種瘧疾控製措施減少瘧疾流行,但對新生兒出生體重的影響有限,瘧疾感染的女性。同樣,出生體重已經通過使用溫和增長沒有針對性孕產婦膳食補充劑(5,6]。迫切需要有一個更好的理解的機製導致低出生體重在孕期瘧疾。這將允許新發展的直接幹預旨在改善出生體重,將補充現有的瘧疾控製措施。在這裏,我們的數據表明,在胎盤炎症介質特征intervillositis抑製胎盤mTOR信號,減少胎盤氨基酸運輸,這可能有助於減少出生體重(無花果。4)。mTOR激活增加表麵豐富的氨基酸轉運蛋白的等離子體膜合胞體滋養層允許增加氨基酸運輸(13),這可能會提高胎兒生長和出生體重。這個標識胎盤mTOR作為幹預的潛在有價值的目標旨在改善出生體重在孕期瘧疾。

4 ebp-1:

真核翻譯起始因子4 e結合蛋白1

一種蛋白激酶:

正義與發展黨胸腺瘤

創新領導力:

CC趨化因子配體

DEPTOR:

部domain-containing mTOR-interacting蛋白質

幹擾素:

幹擾素

IL:

白介素

MCP:

單核細胞趨化蛋白

MIP:

巨噬細胞炎性蛋白

mTOR:

機械的雷帕黴素的目標

mTORC1:

mTOR複雜1

mTORC2:

mTOR複雜2

PHT:

主要人類滋養層

rpS6:

核糖體蛋白6

爵士:

絲氨酸

核:

小幹擾RNA

刺:

蘇氨酸

腫瘤壞死因子:

腫瘤壞死因子

不適用。

資金

這項工作得到了亨利和蕾切爾克曼旅行從醫學院獎學金,牙科和健康科學,墨爾本大學KGD,由美國國立衛生研究院(RHD68370) TJ,澳大利亞NHMRC國債和澳大利亞研究理事會FJIF。伯內特研究所是國家衛生和醫學研究委員會支持的獨立研究機構基礎設施支持計劃,和維多利亞州政府運營基礎設施支持格蘭特。這些機構沒有參與的設計研究和收集、分析和解釋數據,並在寫作手稿。

可用性的數據和材料

在數據集和/或分析在當前研究可從相應的作者以合理的要求。

作者的貢獻

KGD執行大部分的實驗工作和參加寫作手稿。媒體EHA生成的條件。為西方墨點法FR關鍵技術提供幫助。MN cytokine-bead數組進行化驗。詹是一個主要貢獻者係統活動的測量,幫助起草手稿。SJR協調由隊列研究在馬拉維,幫助起草手稿。FJIF執行統計分析。國債是一個主要因素數據分析和解釋,並幫助起草了手稿。TP和TJ監督在體外PHT模式工作。TJ是關鍵在設計、實現和解釋的PHT工作和寫作手稿的主要輸入。PB監督執行的研究中,一些實驗工作,並起草了手稿。所有作者閱讀和批準最終的手稿。

相互競爭的利益

作者宣稱沒有利益衝突。

同意出版

不適用。

倫理批準和同意參與

大學醫學院的研究倫理委員會,馬拉維,批準了這項研究。書麵知情同意得到初產的馬拉維婦女。為在體外工作,胎盤絨毛組織樣本收集與正常健康女性詞懷孕後批準的書麵知情同意科羅拉多多個機構審查委員會(comirb - 14 - 1073)。

作者指出

作者和聯係

1. 醫學係的皇家墨爾本醫院,墨爾本大學,Parkville, 3004年,維多利亞,澳大利亞

   克麗絲Genelyn Dimasuay,伊麗莎白·h·艾特肯Madi Njie,詹姆斯·g . Stephen j .羅傑森Beeson & Philippe牛

2. 生物醫學研究中心,85年伯內特研究所商業道路,3004年,維多利亞,澳大利亞墨爾本

   克麗絲Genelyn Dimasuay,弗雷婭j . i Fowkes James g . Beeson & Philippe牛

3. 產科和婦科,科羅拉多大學安舒茨醫學校園極光,美國公司

   弗雷德裏克·羅薩裏奧,特裏薩·鮑威爾&托馬斯簡頌

4. 孕產婦和胎兒健康研究中心的發育生物學與醫學,醫學科學學院學院生物學、醫學與健康、曼徹斯特大學、聖瑪麗醫院,英國曼徹斯特

   喬斯林裝玻璃

5. 維多利亞時代的傳染病服務,皇家墨爾本醫院,Parkville,維克,澳大利亞

   Stephen j .羅傑森& Philippe牛

6. 墨爾本中心的流行病學和生物統計學,人口和全球衛生學院墨爾本大學,維多利亞,澳大利亞墨爾本

   弗雷婭j . i Fowkes

7. 流行病學和預防醫學、傳染病、莫納什大學、墨爾本,維克,澳大利亞

   弗雷婭j . i Fowkes

8. 部門和中央臨床微生物學,莫納什大學,克萊頓,3800年,維多利亞,澳大利亞

   詹姆斯·g·Beeson

9. 科羅拉多大學兒科學係安舒茨醫學校園極光,美國公司

   特蕾莎鮑威爾

相應的作者

對應到克麗絲Genelyn Dimasuay或菲利普牛。

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